*Presentación (descargar)
Fundamentos
*Tinción tricrómica de Masson
Las tinciones tricrómica son usadas frecuentemente para diferenciar entre colágeno y musculo liso en tumores e identificar incrementos en tejidos colagenosos en enfermedades como cirrosis hepática.
Tinción tricrímica más simple ya que ocupa solo dos colorantes aniónicos después de la tinción nucleica con hematoxilina férrica. Se pueden hacer variación utilizando distintos colorantes o soluciones con distintos heteropoliácidos.
Las tinciones tricrómica son usadas frecuentemente para diferenciar entre colágeno y musculo liso en tumores e identificar incrementos en tejidos colagenosos en enfermedades como cirrosis hepática.
Tinción tricrímica más simple ya que ocupa solo dos colorantes aniónicos después de la tinción nucleica con hematoxilina férrica. Se pueden hacer variación utilizando distintos colorantes o soluciones con distintos heteropoliácidos.
Fundamentos
El rol jugado por el ácido fosfomolíbdico en la tinción selectiva de fibras del tejido conectivo, fue investigado probando la hipótesis: el ácido se une al tejido y de este modo conserva la capacidad de unir colorantes, por la formación de enlaces salinos con sus grupos básicos (del ácido).
La reacción del azul de molibdeno demuestra que el ácido fosfomolíbdico se une a muchas estructuras las cuales son teñidas selectivamente por métodos tricromicos o por la combinación de tinción acido-base del ácido fosfomolíbdico, particularmente tejido conectivo.
Así las propiedades adquiridas de la tinción por las fibras del tejido conectivo, después del tratamiento con ácido fosfomolíbdico están probablemente debido a la presencia de este acido sobre las fibras. El ácido fosfomolíbdico no fue desplazado por el colorante, como sugirió Zeiger, desde una reacción de azul de molibdeno de intensidad regular podría ser aun obtenida después de la tinción con verde claro.
A cualquier velocidad el ácido fosfomolíbdico es intercambiado, probablemente por un anión.
Esto, obviamente, no ocurre desde un colorante aniónico puro que no tiñe fibra del tejido conectivo después del ácido fosfomolíbdico.
Se concluye que el ácido fosfomolíbdico es retenido por el tejido y por enlaces moleculares de colorantes. Hay varias evidencias de que el enlace entre el ácido fosfomolíbdico y el colorante es de naturaleza salina:
1-. La presencia de grupos cationicos en el colorante era indispensable para teñir después del ácido fosfomolíbdico.
2-. Grupos básicos fuertes producen tinción mas intensa
3-. Con colorantes débilmente básicos bajando el pH, y por lo tanto aumentando la disociación de grupos básicos, también aumenta la intensidad de colorantes.
4-. Otros enlaces tales como valencias residuales o puentes de hidrogeno no juegan, probablemente, un rol esencial ya que un numero de colorantes muestra distribución asimétrica de cargas eléctricas y H (labiles) no fueron, o sólo escasamente, establecidos después del tratamiento con ácido fosfomolíbdico. Se concluyó que el colorante y el acido fosfomolíbdico forman una sal en la cual el colorante es el cation.
El hecho de que las fibras de tejido conectivo se unen a sustancias con propiedades acidas (ácido fosfomolíbdico o colorantes con grupo ácido) sugiere que estas fibras contienen grupos básicos, los que forman sales con el ácido fosfomolíbdico. Así el ácido fosfomolíbdico polivalente aparece para formar un puente entre los grupos básicos del sustrato y los grupos básicos del colorante. En otras palabras la adición del ácido fosfomolíbdico en tejido conectivo cambia su acidofilia por basofilia.
El ácido fosfomolíbdico no solamente produce una tinción intensa de las fibras de tejido conectivo por colorantes de grupos básicos (colorantes básicos o anfotéricos), pero también reduce la tinción del citoplasma, así produce una tinción específica de fibras del tejido conectivo.
La explicación de este segundo efecto se encuentra en el hecho de que en el citoplasma, el cual es conocido por teñirse con colorantes de grupos ácidos (colorante acido o anfotérico), se producen algunos enlaces de ácido fosfomolíbdico, aunque menos que en el tejido conectivo.
Las cantidades pequeñas de ácido fosfomolíbdico en el citoplasma previene la salida del colorante acido, y ocurre para tinciones escasas obtenidas con colorantes anfoteritos y para tinciones moderadas obtenidas con colorantes ácidos.
Los procedimientos tricrómicos son nombrados así porque se usan tres tipos de tinciones, que pueden incluir o no la tinción nuclear.
Las secciones se tiñen primero con un colorante ácido como el escarlata biebrich, todos los elementos acidofilicos del tejido como citoplasma, músculo y colágeno se unirán a los colorantes ácidos.
Las secciones después son tratadas con acido fosfotúngstico y/o ácido fosfomolíbdico.
Dado que el citoplasma es mucho menos permeable que el colágeno, el ácido fosfotúngstico y ácido fosfomolíbdico, causan que el colorante escarlata biebrich difunda hacia fuera del colágeno pero no del citoplasma.
Acido fosfotúngstico y/o ácido fosfomolíbdico tienen numerosos grupos acídicos que muy probablemente actuaran como un enlace entre el colágeno descolorado y el azul de anilina, el colorante de colágeno.
Probablemente el pH de la solución ácida fosfotúngstico/ácido fosfomolíbdico también incremente la coloración selectiva del colágeno y contribuye a la difusión o remoción del escarlata de biebrich.
Reactivos
*Hematoxilina férrica de Weigert
- Solución A: Hematoxilina + Alcohol 95%
- Solución B: Cloruro férrico + Agua destilada + Acido clorhídrico
*Solución de Escarlata de Biebrich/Fucsina ácida
- Escarlata de Biebrich + Fucsina ácida + Acido acético
*Solución Acido Fosfotúngstico/Fosfomolíbdico
- Acido fosfotúngstico + Acido fosfomolíbdico + Agua destilada
*Solución Azul de anilina o Azul de toluidina
- Azul de anilina + Agua destilada
Fijador: Líquido de Bouin
Reacción
a) Hematoxilina férrica de Weigert (I)
*Colorante aniónico
*Actúa como mordiente
- Aplicación de alcohol acido para la diferenciación de la tinción nuclear.
b) Solución de Biebrich scarlett-Fucsina ácida (II)
*Colorante aniónico
c) Solución ácido fosfomolíbdico-fosfotúngstico (PMA-PTA)
*Actúa como mordiente y diferenciador
*Solución muy aniónica y de moléculas grandes
*Saca el exceso de colorante y se queda unido al tejido conectivo favoreciendo que el azul de anilina se una por medio del ácido.
d) Azul de anilina o azul de metileno (III)
*Colorante catiónico
e) Solución de ácido acético
Resultados
*Núcleos = Negros
*Citoplasma, queratina y fibras musculares = Rosa, rojas y café
*Fibras colágenas = Azules-Verdes
La reacción del azul de molibdeno demuestra que el ácido fosfomolíbdico se une a muchas estructuras las cuales son teñidas selectivamente por métodos tricromicos o por la combinación de tinción acido-base del ácido fosfomolíbdico, particularmente tejido conectivo.
Así las propiedades adquiridas de la tinción por las fibras del tejido conectivo, después del tratamiento con ácido fosfomolíbdico están probablemente debido a la presencia de este acido sobre las fibras. El ácido fosfomolíbdico no fue desplazado por el colorante, como sugirió Zeiger, desde una reacción de azul de molibdeno de intensidad regular podría ser aun obtenida después de la tinción con verde claro.
A cualquier velocidad el ácido fosfomolíbdico es intercambiado, probablemente por un anión.
Esto, obviamente, no ocurre desde un colorante aniónico puro que no tiñe fibra del tejido conectivo después del ácido fosfomolíbdico.
Se concluye que el ácido fosfomolíbdico es retenido por el tejido y por enlaces moleculares de colorantes. Hay varias evidencias de que el enlace entre el ácido fosfomolíbdico y el colorante es de naturaleza salina:
1-. La presencia de grupos cationicos en el colorante era indispensable para teñir después del ácido fosfomolíbdico.
2-. Grupos básicos fuertes producen tinción mas intensa
3-. Con colorantes débilmente básicos bajando el pH, y por lo tanto aumentando la disociación de grupos básicos, también aumenta la intensidad de colorantes.
4-. Otros enlaces tales como valencias residuales o puentes de hidrogeno no juegan, probablemente, un rol esencial ya que un numero de colorantes muestra distribución asimétrica de cargas eléctricas y H (labiles) no fueron, o sólo escasamente, establecidos después del tratamiento con ácido fosfomolíbdico. Se concluyó que el colorante y el acido fosfomolíbdico forman una sal en la cual el colorante es el cation.
El hecho de que las fibras de tejido conectivo se unen a sustancias con propiedades acidas (ácido fosfomolíbdico o colorantes con grupo ácido) sugiere que estas fibras contienen grupos básicos, los que forman sales con el ácido fosfomolíbdico. Así el ácido fosfomolíbdico polivalente aparece para formar un puente entre los grupos básicos del sustrato y los grupos básicos del colorante. En otras palabras la adición del ácido fosfomolíbdico en tejido conectivo cambia su acidofilia por basofilia.
El ácido fosfomolíbdico no solamente produce una tinción intensa de las fibras de tejido conectivo por colorantes de grupos básicos (colorantes básicos o anfotéricos), pero también reduce la tinción del citoplasma, así produce una tinción específica de fibras del tejido conectivo.
La explicación de este segundo efecto se encuentra en el hecho de que en el citoplasma, el cual es conocido por teñirse con colorantes de grupos ácidos (colorante acido o anfotérico), se producen algunos enlaces de ácido fosfomolíbdico, aunque menos que en el tejido conectivo.
Las cantidades pequeñas de ácido fosfomolíbdico en el citoplasma previene la salida del colorante acido, y ocurre para tinciones escasas obtenidas con colorantes anfoteritos y para tinciones moderadas obtenidas con colorantes ácidos.
Los procedimientos tricrómicos son nombrados así porque se usan tres tipos de tinciones, que pueden incluir o no la tinción nuclear.
Las secciones se tiñen primero con un colorante ácido como el escarlata biebrich, todos los elementos acidofilicos del tejido como citoplasma, músculo y colágeno se unirán a los colorantes ácidos.
Las secciones después son tratadas con acido fosfotúngstico y/o ácido fosfomolíbdico.
Dado que el citoplasma es mucho menos permeable que el colágeno, el ácido fosfotúngstico y ácido fosfomolíbdico, causan que el colorante escarlata biebrich difunda hacia fuera del colágeno pero no del citoplasma.
Acido fosfotúngstico y/o ácido fosfomolíbdico tienen numerosos grupos acídicos que muy probablemente actuaran como un enlace entre el colágeno descolorado y el azul de anilina, el colorante de colágeno.
Probablemente el pH de la solución ácida fosfotúngstico/ácido fosfomolíbdico también incremente la coloración selectiva del colágeno y contribuye a la difusión o remoción del escarlata de biebrich.
Reactivos
*Hematoxilina férrica de Weigert
- Solución A: Hematoxilina + Alcohol 95%
- Solución B: Cloruro férrico + Agua destilada + Acido clorhídrico
*Solución de Escarlata de Biebrich/Fucsina ácida
- Escarlata de Biebrich + Fucsina ácida + Acido acético
*Solución Acido Fosfotúngstico/Fosfomolíbdico
- Acido fosfotúngstico + Acido fosfomolíbdico + Agua destilada
*Solución Azul de anilina o Azul de toluidina
- Azul de anilina + Agua destilada
Fijador: Líquido de Bouin
Reacción
a) Hematoxilina férrica de Weigert (I)
*Colorante aniónico
*Actúa como mordiente
- Aplicación de alcohol acido para la diferenciación de la tinción nuclear.
b) Solución de Biebrich scarlett-Fucsina ácida (II)
*Colorante aniónico
c) Solución ácido fosfomolíbdico-fosfotúngstico (PMA-PTA)
*Actúa como mordiente y diferenciador
*Solución muy aniónica y de moléculas grandes
*Saca el exceso de colorante y se queda unido al tejido conectivo favoreciendo que el azul de anilina se una por medio del ácido.
d) Azul de anilina o azul de metileno (III)
*Colorante catiónico
e) Solución de ácido acético
Resultados
*Núcleos = Negros
*Citoplasma, queratina y fibras musculares = Rosa, rojas y café
*Fibras colágenas = Azules-Verdes
