1) DESHIDRATACIÓN
*La función principal de este proceso es la extracción del agua del tejido.
*Se realiza antes de la inclusión y antes del montaje.
*Es necesaria para la utilización de medios no acuosos (hidrofóbicos) como la parafina, celoidina y algunos plásticos, porque no infiltran en tejidos con agua.
*Una excesiva deshidratación produce un tejido duro difícil de cortar.
*Una deshidratación uncompleta produce que el agente aclarante no actue apropiadamente y se obtendrán bloques blandos, además produce la mayor cantidad de problemas en los pasos posteriores del procesamiento histológico.
Métodos
*Reactivos hidrofílicos atraen el agua del tejidos extrayendolo.
*Reactivos que deshidratan por dilución repetitiva de los fluidos acuosos del tejido.
Alcoholes
*El alcohol absoluto tiene a lo más 1% o 2% de agua.
*Si se agrega unos ml de OH 100% al Xilol y se observa turbidez es por la presencia de agua en un porcentaje mayor al 2% lo que produce una acción inadecuada e imcompleta del agente aclarante.
+Alcohol etílico / Etanol
*Es hidrofílico y de acción rápida.
*La graduación produce la retracción.
*El uso por periodos de tiempo extendidos produce gran retracción y endurecimiento.
*Etanol junto con otros alcoholes mezclados disminuye la coloración.
+Isopropanol
*La eosina es insoluble en este alcohol.
*No sirve para la inclusión en Celoidina.
*Endurece y retrae poco.
*Se utiliza principalmente en procesos para plantas y animales.
Acetona
*Actúa rápido, produce excesiva retracción y es muy inflamable.
Solventes universales
*Deshidratan y aclaran al mismo tiempo.
*Dioxano, Butanol terciario y Tetrahidrofurano.
+Dioxano
*Produce menos retracción durante la deshidratación.
*Actúa más rápido que el etanol.
*Se debe usar grandes cantidades de volumen.
*En exposición larga no produce grandes cambios indeseables.
+Butanol terciario
*Se usa en proporción 50/50 con la parafina en la primera infiltración.
+Tetrahidrofurano
*Es miscible con todo
*Actúa rápido sin causar fuerte retracción y endurecimiento.
2) ACLARAMIENTO
*Los reactivos usados tienen un alto índice de refracción y pone a tejido claro o transparente.
*Miscible en agentes deshidratanes y medios de infiltración.
*El uso de agentes aclarantes durante largos periodos produce endurecimiento.
*Una aclaración excesiva produce desnaturación de proteínas dificultando la microtomía.
Xileno
*Acción más o menos rápida.
*Produce aclaramiento del tejido.
*Su adecuada acción de determina en la infiltración.
*Xileno de apariencia transparente es a causa de exceso de agua.
Tolueno
*Produce poco endurecimiento y posee tolerancia al agua.
Benceno
*Se evapora rápido, lo que permite la disminución de cambios de parafina.
3) INFILTRACION
*Mantiene a las celulas y estructuras celulares en su relación propia al ser cortadas en secciones finas.
+Medios de inclusión solubles en agua (hidrofilos)
Polietilglicol (PEG) / Carbowax
*Infiltra directamente después del fijador, sin pasar por deshidratación y aclaramiento, por lo que la rasa no se disuelve, sin embargo, esto no ocurre en tejidos con gran cantidad de grasa (ej. tejido adiposo).
*Se infiltran los tejidos con estos medios cuando quedan muy blandos.
Plástico Glicolmetacrilato (GMA)
*Resina acrílica miscible con agua.
*Provee un medio adecuado para tejidos duros (ej. hueso).
*No se adhiere muy bien al portaobjetos dificultando la tinción pero se puede disminuir el tiempo con microondas.
Agar y gelatina
*Sirve para hacer un bloque de fragmentos cortados congelados y también para infiltrarse.
+Medios de inclusión insolubles en agua (hidrófobos)
Parafina
*Permite cortar varias secciones de un taco de forma rápida y fácil.
*Se pueden mezclar (plástico + parafina = paraplast da una mayor dureza al medio)
*Dependen de su punto de fusión, entre mayor sea este mas duro es el medio.
*El tiempo debe ser el más corto para una buena infiltración por el efecto del calor sobre las proteínas.
Celoidina (colodion, n-celulosa, paradion)
Resina epoxi (plástico)
*Necesita un fluido transicional como el óxido de propileno.
*Sirve para microscopía electrónica (también para microscopía óptica) y para estudios ultraestructurales.
4) INCLUSION
*Es esta etapa se forma un bloque encapsulando al tejido en el medio de inclusión usado para procesar y permitir al medio solidificar.
*Debe tenerse encuenta la orientación del tejido con la que posteriormente se cortará.
Bibliografía
Histotechnoogy A Self Instructional Text, Freida L. Carson, Second Edition, Cap. 2, Pag. 26-41.
*La función principal de este proceso es la extracción del agua del tejido.
*Se realiza antes de la inclusión y antes del montaje.
*Es necesaria para la utilización de medios no acuosos (hidrofóbicos) como la parafina, celoidina y algunos plásticos, porque no infiltran en tejidos con agua.
*Una excesiva deshidratación produce un tejido duro difícil de cortar.
*Una deshidratación uncompleta produce que el agente aclarante no actue apropiadamente y se obtendrán bloques blandos, además produce la mayor cantidad de problemas en los pasos posteriores del procesamiento histológico.
Métodos
*Reactivos hidrofílicos atraen el agua del tejidos extrayendolo.
*Reactivos que deshidratan por dilución repetitiva de los fluidos acuosos del tejido.
Alcoholes
*El alcohol absoluto tiene a lo más 1% o 2% de agua.
*Si se agrega unos ml de OH 100% al Xilol y se observa turbidez es por la presencia de agua en un porcentaje mayor al 2% lo que produce una acción inadecuada e imcompleta del agente aclarante.
+Alcohol etílico / Etanol
*Es hidrofílico y de acción rápida.
*La graduación produce la retracción.
*El uso por periodos de tiempo extendidos produce gran retracción y endurecimiento.
*Etanol junto con otros alcoholes mezclados disminuye la coloración.
+Isopropanol
*La eosina es insoluble en este alcohol.
*No sirve para la inclusión en Celoidina.
*Endurece y retrae poco.
*Se utiliza principalmente en procesos para plantas y animales.
Acetona
*Actúa rápido, produce excesiva retracción y es muy inflamable.
Solventes universales
*Deshidratan y aclaran al mismo tiempo.
*Dioxano, Butanol terciario y Tetrahidrofurano.
+Dioxano
*Produce menos retracción durante la deshidratación.
*Actúa más rápido que el etanol.
*Se debe usar grandes cantidades de volumen.
*En exposición larga no produce grandes cambios indeseables.
+Butanol terciario
*Se usa en proporción 50/50 con la parafina en la primera infiltración.
+Tetrahidrofurano
*Es miscible con todo
*Actúa rápido sin causar fuerte retracción y endurecimiento.
2) ACLARAMIENTO
*Los reactivos usados tienen un alto índice de refracción y pone a tejido claro o transparente.
*Miscible en agentes deshidratanes y medios de infiltración.
*El uso de agentes aclarantes durante largos periodos produce endurecimiento.
*Una aclaración excesiva produce desnaturación de proteínas dificultando la microtomía.
Xileno
*Acción más o menos rápida.
*Produce aclaramiento del tejido.
*Su adecuada acción de determina en la infiltración.
*Xileno de apariencia transparente es a causa de exceso de agua.
Tolueno
*Produce poco endurecimiento y posee tolerancia al agua.
Benceno
*Se evapora rápido, lo que permite la disminución de cambios de parafina.
3) INFILTRACION
*Mantiene a las celulas y estructuras celulares en su relación propia al ser cortadas en secciones finas.
+Medios de inclusión solubles en agua (hidrofilos)
Polietilglicol (PEG) / Carbowax
*Infiltra directamente después del fijador, sin pasar por deshidratación y aclaramiento, por lo que la rasa no se disuelve, sin embargo, esto no ocurre en tejidos con gran cantidad de grasa (ej. tejido adiposo).
*Se infiltran los tejidos con estos medios cuando quedan muy blandos.
Plástico Glicolmetacrilato (GMA)
*Resina acrílica miscible con agua.
*Provee un medio adecuado para tejidos duros (ej. hueso).
*No se adhiere muy bien al portaobjetos dificultando la tinción pero se puede disminuir el tiempo con microondas.
Agar y gelatina
*Sirve para hacer un bloque de fragmentos cortados congelados y también para infiltrarse.
+Medios de inclusión insolubles en agua (hidrófobos)
Parafina
*Permite cortar varias secciones de un taco de forma rápida y fácil.
*Se pueden mezclar (plástico + parafina = paraplast da una mayor dureza al medio)
*Dependen de su punto de fusión, entre mayor sea este mas duro es el medio.
*El tiempo debe ser el más corto para una buena infiltración por el efecto del calor sobre las proteínas.
Celoidina (colodion, n-celulosa, paradion)
Resina epoxi (plástico)
*Necesita un fluido transicional como el óxido de propileno.
*Sirve para microscopía electrónica (también para microscopía óptica) y para estudios ultraestructurales.
4) INCLUSION
*Es esta etapa se forma un bloque encapsulando al tejido en el medio de inclusión usado para procesar y permitir al medio solidificar.
*Debe tenerse encuenta la orientación del tejido con la que posteriormente se cortará.
Bibliografía
Histotechnoogy A Self Instructional Text, Freida L. Carson, Second Edition, Cap. 2, Pag. 26-41.
